1 Kapalná chemikálie
Kyselina peroctová neboli peroxyoctová byla prvním germicidem používaným ke sterilizaci izolátorů a stále se používá díky své účinnosti, nízké ceně a kompatibilitě s většinou plastů. Je účinná při nízkých koncentracích a teplotách a v kapalné formě i v přítomnosti organických látek, i když neproniká do cyst parazitů a vajíček členovců (van der Gulden a van Erp, 1972). Je k dispozici u dodavatelů laboratorních chemikálií jako kapalina obsahující 40 % kyseliny peroctové. Hlavní výhodou kyseliny peroctové je, že je účinná v parní i kapalné fázi (Block, 2001; Trexler, 1984). Páry vzniklé při postřiku 1-2% roztokem při pokojové teplotě inaktivují nejodolnější bakterie a spory plísní do 15 minut a přímá aplikace kapaliny dosáhne stejného účinku do 1 minuty (Trexler, 1984). Někdy se používá kyselina peroctová o koncentraci 4 %, ale ze skutečných gnotobiotických aplikací nejsou důkazy, že by byla účinnější než 1 % (R. Orcutt, osobní sdělení, březen 2014). Optimální sporicidní účinnosti v parní fázi je dosaženo při 80% relativní vlhkosti vzduchu. Roztok kyseliny peroctové by měl být vždy připraven bezprostředně před použitím, protože během 24 h ztrácí přibližně polovinu své síly. 30 minut kontaktní doby je dostačující. Kyselina peroctová je žíravá a dráždí oči, kůži a dýchací cesty. Pracovníci používající kyselinu peroctovou by měli nosit rukavice, jednorázový oděv a celoobličejový respirátor s patronami s chemickým filtrem. Agentura pro ochranu životního prostředí, Úřad pro bezpečnost a ochranu zdraví při práci ani Národní toxikologický program nepovažují kyselinu peroctovou za karcinogen a není genotoxická ani mutagenní (Malchesky, 2001), ačkoli může být promotorem nádorů.
Kombinace kyseliny peroctové s peroxidem vodíku vede k synergické antimikrobiální aktivitě (Block, 2001). Spor-Klenz™ (Steris Life Sciences), sterilizační roztok připravený k použití obsahující 1 % peroxidu vodíku a 0,08 % kyseliny peroctové, má širokou sporicidní účinnost a zcela inaktivuje Mycobacterium spp. po 20 minutách kontaktu při 20 °C (Rutala et al., 1991). Stal se uznávaným sterilizačním prostředkem pro gnotobiotika. Doporučuje se doba kontaktu 1 h. K dispozici jsou i další přípravky kombinující kyselinu peroctovou a peroxid vodíku, jak je uvedeno níže.
Dioxid chloričitý v kapalné formě je nyní nejčastěji používaným sterilizačním prostředkem pro gnotobiotika. Je vysoce účinný proti všem mikroorganismům a stejně jako kyselina peroctová je účinný v plynné i kapalné fázi (Jeng a Woodworth, 1990; Knapp a Battisti, 2001; Orcutt a kol., 1981; Pell-Walpole a Waller, 1984). V plynném stavu je 1075krát sporicidnější než ethylenoxid (Jeng a Woodworth, 1990). Mezi kapalné sterilizátory na bázi oxidu chloričitého patří Exspor™ (Ecolab Inc.) a Clidox-S™ (Pharmacal Research Laboratories). Ty se skládají ze dvou částí, základního roztoku chloritanu sodného a kyselého aktivátoru, které se bezprostředně před aplikací spojí a smíchají s vodou za vzniku roztoku kyseliny chloristé a oxidu chloričitého. Doporučuje se doba kontaktu nejméně 30 minut. Takové produkty mohou způsobit korozi nerezové oceli.
Steriplex™ SD (sBioMed) je dvousložkový produkt využívající stříbro, kyselinu peroctovou a etanol (0,015 %, 0,15 % a 10 % v aktivovaném produktu). Prodává se jako dezinfekční, nikoli sterilizační prostředek pro nemocniční a jiné aplikace. Výrobce však uvádí, že je sporicidní, baktericidní, fungicidní a viricidní, rychle inaktivuje spory Clostridium difficile a Bacillus subtilis, nedráždí a má trvanlivost 60 dní po aktivaci (Robison, 2012; sBioMed, 2013a, b, c). Steriplex™ SD se začal používat pro gnotobiotické použití (C. Bell, osobní sdělení, leden 2014). V našich testech Steriplex™ SD usmrtil proužky se spórami Geobacillus stearothermophilus 106 za 10 min a proužky Bacillus atropheus 106 za 30 min.
Mezi další tekuté sterilizační a „vysokoúrovňové“ dezinfekční přípravky patří Actril™ (0.08% kyselina peroctová a 1,0% peroxid vodíku; Mar Cor Purification), Cidexplus™ 28denní roztok (3,4% glutaraldehyd; Johnson & Johnson), Minncare™ (4.5% kyseliny peroctové a 22,0% peroxidu vodíku; Minntech BV), PeridoxRTU™ (4,0-4,8% peroxid vodíku a 0,17-0,29% kyselina peroctová; Contec Inc.), Vimoba™ (oxid chloričitý; Quip Laboratories), Sanosil S010™ (5% peroxid vodíku a 0.01% dusičnan stříbrný; Sanosil International), Sporgon™ (7,35% peroxid vodíku a 0,23% PAA; Decon Laboratories) a Wavicide-01™ (2,65% glutaraldehyd; Medical Chemical Corporation). Nejsou nám známy zprávy o hodnocení některého z těchto produktů pro použití v gnotobiotice.
Existuje velké množství literatury o testování tekutých sterilizačních a dezinfekčních postupů ve zdravotnictví a potravinářství; bohužel však existuje jen málo informací týkajících se srovnávací účinnosti nebo standardizovaného testování aplikovaného přímo na gnotobiotiku. Uživatelé by si měli uvědomit, že výsledky standardizovaných testovacích metod se mohou značně lišit. Organismy na povrchu se téměř vždy usmrcují obtížněji než organismy v suspenzi (Berube et al., 2001; Gibson et al., 1995; Sagripanti a Bonifacino, 1999, 2000; Springthorpe a Sattar, 2005; van Klingeren et al., 1998) a při povrchových testech mohou různé materiály poskytovat různé výsledky (Thorn et al., 2013). Výsledky standardizovaných testů navíc nemusí nutně ukazovat účinnost v prostředí, ve kterém budou sterilizační prostředky a postupy skutečně používány (Gibson et al., 1995; R. Orcutt, osobní sdělení, březen 2014). Podle našeho názoru má použití standardních laboratorních testů k porovnání výrobků, u nichž je dobře prokázáno, že jsou při správném použití účinnými sterilizátory, mnohem menší hodnotu než zjištění, že aplikace sterilizačního prostředku – tedy postupy, při nichž se používá – jsou účinné a spolehlivé. Metody, které používáme, jsou popsány na příslušných místech této kapitoly. Posledním doporučením je, že i když se člověk rozhodne ověřit sterilizaci kapalinou, je důležité zjistit, zda je sterilizace skutečná a ne pouze zdánlivá v důsledku inhibice růstu. To lze provést pomocí technik ředění, neutralizačních médií nebo jejich kombinací. Dey-Engleyho neutralizační bujón dobře funguje se sterilizačními prostředky oxidem chloričitým a kyselinou peroctovou (Espigares et al., 2003; Sutton et al., 2002; Terleckyj a Axler, 1987). V našich rukou však Steriplex SD™ neutralizovat nedokázal.
Pracovníkům nozokomiálních zařízení doporučujeme, aby ohledně používání aerosolových sterilizátorů spolupracovali s pracovníky ochrany zdraví a bezpečnosti při práci v instituci. Mělo by být provedeno posouzení pracovních rizik za účelem zavedení používání vhodných osobních ochranných prostředků (chemický respirátor, rukavice, ochranné brýle, obličejový štít atd.) a technických kontrol, jako je odsávání vzduchu k odvádění chemických výparů od personálu.