Nukleáza, enzym, který štěpí nukleové kyseliny. Nukleázy, které patří do třídy enzymů nazývaných hydrolázy, mají obvykle specifický účinek, ribonukleázy působí pouze na ribonukleové kyseliny (RNA) a deoxyribonukleázy pouze na deoxyribonukleové kyseliny (DNA). Některé enzymy s obecným účinkem (např. fosfoesterázy, které hydrolyzují estery kyseliny fosforečné) lze nazvat nukleázami, protože nukleové kyseliny jsou k jejich působení citlivé. Nukleázy se vyskytují u živočichů i rostlin.
Restrikční enzymy jsou nukleázy, které štěpí pouze ty molekuly DNA, v nichž rozpoznávají určité podjednotky. Některé štěpí cílovou molekulu DNA v náhodných místech (typ I), ale jiné štěpí molekulu pouze v místě rozpoznání (typ II) nebo v pevné vzdálenosti od místa rozpoznání (typ III). Restrikční enzymy typu II a III jsou mocnými nástroji při objasňování sekvence bází v molekulách DNA. Hrají zásadní roli v oblasti technologie rekombinantní DNA neboli genového inženýrství.