Březen 2020 Sdílet
Metody a technologie izolace buněk využívají buď pozitivní, nebo negativní separaci buněk. Zde jsou uvedeny některé rozdíly při zvažování přístupu separace buněk:
Pozitivní vs. negativní selekce:
Pozitivní selekce zahrnuje zaměření požadované buněčné populace pomocí protilátky specifické pro povrchový marker buňky (CD4, CD8 atd.). Cílené buňky jsou pak ponechány pro následnou analýzu.
Negativní selekce spočívá v tom, že se odstraní několik typů buněk, přičemž typ buněk, který vás zajímá, zůstane nedotčen. Podobně jako u metod pozitivní selekce jsou buňky označeny protilátkami, které jsou zaměřeny na specifické povrchové buněčné markery nebo populace. V případě negativní selekce jsou však nežádoucí buňky ty, které jsou označeny a následně odstraněny.
Jaké jsou výhody a nevýhody každé z nich?
Obě metody pozitivní a negativní selekce mají své výhody a nevýhody.
Jednou z hlavních výhod pozitivní selekce je, že izolované buňky jsou ve srovnání s negativní selekcí vysoce purifikované. Tato vysoká čistota je způsobena specifickými protilátkami použitými k zacílení na určitý typ buněk. Kromě toho lze u pozitivně selektovaných buněk provádět sekvenční izolace. U mnoha technologií však pozitivně vybrané buňky zůstávají navázané na protilátky nebo jiná značkovací činidla, což může ovlivnit některé navazující testy.
Na druhé straně negativní selekce produkuje cílené buňky, které nejsou navázané na protilátky. Protokoly izolace buněk pomocí negativní selekce jsou také rychlejší a jednodušší než přístupy pozitivní selekce. Jednou z nevýhod však je, že metody negativní selekce jsou ze své podstaty méně čisté než metody pozitivní selekce, protože je obtížnější zaměřit se na všechny nežádoucí buňky než na jednu požadovanou populaci buněk.
Jak si vybrat přístup k separaci buněk?
Výběr metody pozitivní nebo negativní selekce závisí jak na populaci buněk, tak na potenciálních výzkumných aplikacích.
Je na povrchu typu buněk, na který se chcete zaměřit, robustní selekční marker? Pokud ano, zvažte metody pozitivní selekce. Pokud ne, zvažte metody negativní selekce.
Mohou protilátky nebo jiná značkovací činidla připojená k cílovým buňkám ovlivnit navazující testy nebo výzkumné aplikace? Pokud ano, může mít větší smysl použít metody negativní selekce. Pokud ne, vyzkoušejte metody pozitivní selekce.