March 2020 Share
Celisolatiemethoden en -technologieën maken gebruik van een positieve of negatieve celscheidingsaanpak. Hier volgen enkele van de verschillen bij het overwegen van een celscheidingsaanpak:
Positieve vs. Negatieve selectie: Wat is het verschil?
Positieve selectie is gericht op de gewenste celpopulatie met een antilichaam dat specifiek is voor een celoppervlaktemarker (CD4, CD8, enz.). De gerichte cellen worden vervolgens behouden voor downstream analyse.
Negatieve selectie is wanneer verschillende celtypen worden verwijderd, waardoor het celtype van belang onaangetast blijft. Net als bij positieve selectie worden cellen gelabeld met antilichamen die gericht zijn op specifieke celoppervlaktemarkers of -populaties. Bij negatieve selectie worden echter de ongewenste cellen gelabeld en vervolgens verwijderd.
Wat zijn de voor- en nadelen van elk?
Zowel positieve als negatieve selectiemethoden hebben hun voor- en nadelen.
Een van de belangrijkste voordelen van positieve selectie is dat de geïsoleerde cellen zeer gezuiverd zijn in vergelijking met negatieve selectie. Deze hoge zuiverheid is te danken aan de specifieke antilichamen die worden gebruikt om een bepaald celtype aan te pakken. Bovendien kunnen sequentiële isolaties worden uitgevoerd op positief geselecteerde cellen. Veel technologieën, echter, laat de positief geselecteerde cellen gebonden aan de antilichamen of andere labeling agents, die sommige downstream assays kan beïnvloeden.
Aan de andere kant, negatieve selectie produceert gerichte cellen die ongebonden zijn door antilichamen. Cel isolatie protocollen met behulp van negatieve selectie zijn ook sneller en gemakkelijker dan positieve selectie benaderingen. Een nadeel is echter dat negatieve selectiemethoden inherent minder zuiver zijn dan positieve selectiemethoden, omdat het moeilijker is om alle ongewenste cellen te targeten dan één gewenste celpopulatie.
Hoe kies ik een celscheidingsbenadering?
De keuze om een positieve of negatieve selectiemethode te gebruiken, hangt af van zowel uw celpopulatie als potentiële onderzoekstoepassingen.
Is er een robuuste selectiemarker op het oppervlak van het celtype dat u wilt targeten? Zo ja, overweeg dan positieve selectiemethoden. Zo nee, overweeg dan negatieve selectiemethoden.
Kunnen antilichamen of andere labelingmiddelen die aan uw doelcellen zijn bevestigd, van invloed zijn op downstream assays of onderzoekstoepassingen? Zo ja, dan is het wellicht zinvoller om negatieve selectiemethoden te gebruiken. Zo nee, probeer dan positieve selectiemethoden.