Marzec 2020 Share
Metody i technologie izolacji komórek wykorzystują pozytywne lub negatywne podejście do separacji komórek. Oto niektóre z różnic przy rozważaniu podejścia do separacji komórek:
Pozytywna vs. Negatywna selekcja: What’s the Difference?
Selekcja pozytywna obejmuje namierzanie pożądanej populacji komórek za pomocą przeciwciała specyficznego dla markera powierzchni komórkowej (CD4, CD8, itp.). Dobrane komórki są następnie zachowywane do dalszych analiz.
Selekcja negatywna polega na usunięciu kilku typów komórek, pozostawiając typ komórki będący przedmiotem zainteresowania nietknięty. Podobnie do metod selekcji pozytywnej, komórki są znakowane przeciwciałami, które celują w specyficzne markery powierzchni komórkowej lub populacje. Jednakże, w przypadku selekcji negatywnej, niepożądane komórki są znakowane, a następnie usuwane.
Jakie są zalety i wady każdej z nich?
Oba podejścia selekcji pozytywnej i negatywnej mają swoje zalety i wady.
Jedną z głównych zalet selekcji pozytywnej jest to, że izolowane komórki są wysoce oczyszczone w porównaniu z selekcją negatywną. Ta wysoka czystość jest spowodowana specyficznymi przeciwciałami używanymi do namierzania konkretnego typu komórek. Dodatkowo, na komórkach poddanych selekcji pozytywnej można przeprowadzać sekwencyjne izolacje. Wiele technologii pozostawia jednak dodatnio wyselekcjonowane komórki związane z przeciwciałami lub innymi czynnikami znakującymi, co może wpływać na niektóre oznaczenia końcowe.
Z drugiej strony, selekcja negatywna wytwarza komórki, które nie są związane przez przeciwciała. Protokoły izolacji komórek przy użyciu selekcji negatywnej są również szybsze i łatwiejsze niż metody selekcji pozytywnej. Jedną z wad jest jednak to, że metody selekcji negatywnej są z natury mniej czyste niż metody selekcji pozytywnej, ponieważ trudniej jest wyselekcjonować wszystkie niepożądane komórki niż jedną pożądaną populację komórek.
Jak wybrać metodę separacji komórek?
Wybór metody selekcji pozytywnej lub negatywnej zależy zarówno od populacji komórek, jak i potencjalnych zastosowań badawczych.
Czy na powierzchni typu komórek, na które chcemy oddziaływać, znajduje się odporny marker selekcyjny? Jeśli tak, rozważ metody selekcji pozytywnej. Jeśli nie, należy rozważyć metody selekcji negatywnej.
Czy przeciwciała lub inne czynniki znakujące dołączone do komórek docelowych mogą wpłynąć na dalsze analizy lub zastosowania badawcze? Jeśli tak, bardziej sensowne może być zastosowanie metod selekcji negatywnej. Jeśli nie, wypróbuj metody selekcji pozytywnej.